Técnicas de  Investigación y  Diagnóstico en Biología y Medicina

Indice

 

Capítulo 1

Microscopía

Analía C. Nessi

 

Microscopio Óptico

Definiciones

Cálculo de la magnificación. Resolución

Profundidad de campo

Aberración cromática

Apertura numérica

Microscopio de campo obscuro

Birrefringencia

Dicroísmo

Microscopio de contraste de fase

Microscopía de contraste diferencial interferencia

Microscopio de fluorescencia. Propiedades. Componentes ópticos

Microscopio Confocal

Citómetro láser de barrido

Microscopio Electrónico de Transmisión

Microscopio Electrónico de Barrido

 

Capítulo 2

Técnica Histológica

Analía C. Nessi

 

Microscopía óptica

Recolección del material

Fijación. Fenómenos íntimos. Cualidades del fijador. Mezclas fijadorqas. Técnicas de fijación. Volumen de las muestras. Duración de la fijación.

Inclusión.

Cortes

Montaje

Coloración. Concepto. Diferentes tipos

Montaje final

Técnicas de coloración.

Hematoxilima-eosina. Coloración fetal con alizarina. Coloración de Shorr para frotis vaginal. Impregnación argéntica. Método de Golgi. Técnicas de Cajal con oro sublimado. Técnicas de Río Hortega.

 

Capítulo 3

Técnica Histológica para tejidos mineralizados

Patricia Mandalunis

 

Tejido óseo

Descalcificación

Sin descalcificar

Tejidos dentarios

Método tricrómico de Masson modificado

 

 

Capítulo 4

Técnica para Microscopía electrónica

Analía Nessi

 

Obtención del material. Fijación. Deshidratación. Soluciones intermedias. Inclusión. Polimerización

Obtención de los cortes

Grillas

Coloración: Permanganato de Potasio, Acetato de uranilo. Reactivo de Reynolds. Técnica de Gómez Dumm. Coloración negativa. Técnica para espacios intersticiales.

 

Capítulo 5

Preservación de la ultraestructura de muestras biológicas

Marta I Mariano y Juan P Bozzini

 

Procedimientos básicos

Fijación

Deshidratación

Inclusión. Resinas de Poliéster. Medios solubles en agua

Seccionamiento. Ultramicrotomía

Tinción de los cortes. Microscopía óptica. Microscopía electrónica

 

Capítulo 6

Microscopía electrónica de barrido

Ángela M Ubios

 

Introducción

Técnica para la preparación de las muestras

 

Capítulo 7

Histoquímica de hidratos de carbono

Alcira O Díaz y Lía Goldemberg

 

Glucosaminoglocanos y proteoglucanos

Glucoproteínas

Técnica de PAS. Método (Mc Manus 1948)

Reactivo de Schiff. Método de  Coleman. Método de Lillie.

Controles de identificación de glucógeno, de presencia de aldehidos libres, de oxidación de grupos 1-2 glicol

Acetilación (Materazzi y Ferreti, 1970)

Saponificación (Martoja y Martoja-Pierson)

Alcian Blue

Metacromasia. Técnica de Azul de Toluidina

HID y LID. Método (Spicer, 1965)

 

 

Capítulo 8

Inmunocitoquímica

Alicia Brusco

 

El anticuerpo

Preparación del inmunógeno

Obtención de AC inmunoespecíficos

Elección del fijador. Lavados

Inclusión.

Realización de los cortes. Parafina. Vibrátomo. Crióstato.

Ultrafinos para microscopía electrónica

Procesamiento Inmunocitoquímico

Inhibición de la peroxidasa endógena

Permeabilización de los cortes

Bloqueo de sitios inespecíficos

Desbloqueo de sitios antigénicas

Disminución del fondo

Inmunofluorescencia directa e indirecta

Métodos inmunoenzimáticos

Inmunoperozidasa indirecta

PAP

Técnica de avidita biotina

Inmunooro. Ejemplo de aplicación

Revelado con diaminobencidina. Pasos fundamentales

Preparación de portas gelatinados.

Solución de gelatina

 

Capítulo 9

Electroforesis en gel de poliacrilamida

Gonzalo M De Hoz

 

Electroforesis unidimensional

Bidimensional

Western blotting

 

Capítulo 10

Southern, Northern, Western y Dot Blot

Ezequiel Guaraglia

 

Southern Blot. Corte con endonucleasas de restricción

Electroforesis. Transferencia. Hibridización. Radioautografía. Northern Blot. Western Blot. Dot Blot

 

Capítulo 11

Inmunodeterminación de componentes en plasma o suero

Patricia Grenni y Analía Nessi

 

IRMA

Técnica del ensayo. Procedimiento para resultados o muestras fuera del rango

RIA

RIAs en sistemas básicos (en fase sólida)

Anticuerpo específico.

Antígeno marcado. Antígeno patrón

Técnicas de separación.

Técnica del ensayo para T4. Limitaciones del procedimiento

Técnica del ensayo para Estradiol

Determinación de IgE específicas mediante el método RAST. Técnica del ensayo

Inmunodifusión radial (IDR) Método de Margni. Método comercial DiffuPlate. Precauciones

 

Capítulo 12

Marcadores moleculares para la identificación de personas y estudios de filiación

Andrés Insúa

 

Satélites, minisatélites y microsatélites

Sistemas multilocus y unilocus

Métodos de análisis. Sothern Blot, PCR y PAGE. Comparación entre los distintos marcadores.

Historia

Estudios poblacionales

Cálculo estadístico

ADN mitocondrial

 

 

Capítulo 13

Métodos para la detacción de ácidos nucleicos

María Ximena Valenzuela

 

Procesamiento de la muestra

Amplificación del ácido nucleico

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Amplificación basada en la secuencia de ácidos nucleicos y replicación secuencial auto-sostenida

Transcripción Ligando activada (LAT)

Amplificación de desplazamiento de hebra

Amplificación de ña sonda. Reacción en cadena de la ligasa (LCR)

Sistema de replicasa Q-Beta

Tecnología cíclica de sonda. Sistemas de detección

Enzimoinmunoensayo (EIA)

Inmunocromatografía

Detección basada en la secuencia

Amplificación de la señal. Quimioluminiscencia

Determinación de la eficacia clínica del diagnóstico por PCR. Técnica de PCR. Factores controlables. Elección de los primers. MgCl2

Deoxinucleótidos trifosfatos. Polimerasa

Desnaturalización a 95° C. Annealing 55° C

Efectos no controlables. Plateau. Factores que llevan al Plateau. Inactivación térmica de la polimerasa. Su concentración límite. Reducción de la eficiencia por desnaturalización del ciclo. Ineficiencia en primer annealing

Protocolo: Amplificación y detección de ADN (HIV) en muestras de sangre entera. Recolección de muestras y preparación. Amplificación de la PCR

Método de electroquimioluminiscencia

 

 

 

 

           

 

 

   

 

 

 

 

 

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